Научная деятельность

Темы НИР:

1. Изучение растворимых дифференцировочных антигенов при иммуноопосредованных заболеваниях.

Изучены изменения в сывороточном уровне растворимых дифференцировочных молекул при таких иммуноопосредованных заболеваниях как острый панкреатит и хроническая обструктивная болезнь легких. Показано, что в течение первых четырех суток у больных некротическим и интерстициальным панкреатитом без развития острого некроза уровень растворимых молекул CD95 не меняется, но повышается при развитии острого некроза. Формирование жидкостных скоплений сопровождалось повышением уровня растворимых молекул СD95. При некротическом панкреатите с развитием респираторного дистресс-синдрома повышался уровень растворимых молекул ICAM-1. У больных с тяжелым обострением хронической обструктивной болезнью легких сывороточный уровень олигомерных и суммарных фракций растворимых молекул CD95, CD38, CD25, CD54, CD50, HLA-DR при не инвазивной вентиляции легких в режиме двухуровневой вентиляции понижался на фоне улучшения общего состояния и снижения интенсивности одышки. Поскольку применение не инвазивной вентиляции позволяет снизить курсовую дозу системных кортикостероидов, данная методика может быть рекомендована для более широкого использования в пульмонологической практике.

2. Исследование в области иммуноонкологии.

В опухолевых очагах больных раком молочной железы проведена оценка взаимосвязи между экспрессией гена, кодирующего опухолевый маркер MUC1 и генов, принимающих участие в реализации иммунологических реакций. Методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени исследовали экспрессию генов MUC1, Fas, ICAM1, FcγR3A, FcγR3B, FoxP3, IL2Rα, IL32 и TNF. Обнаружена прямая корреляция между уровнями мРНК MUC1, ICAM1, IL32, FcγR3A и FoxP3. Наиболее тесная связь регистрировалась между уровнями экспрессии генов MUC1 и IL32. По сравнению с MUC1-негативными, MUC1-позитивные карциномы молочной железы характеризовались более высоким уровнем мРНК провоспалительных цитокинов IL32 и TNF, молекулы адгезии ICAM1 и молекулярного маркера Т-регуляторных клеток FoxP3. Данный профиль экспрессии генов в опухолях больных рака молочной железы показывает связь экспрессии MUC1 с воспалением и его модуляцией Т-регуляторными клетками.

3. Исследования мукозального иммунитета.

Исследованы закономерности и особенности экспрессии иммунореактивности слизистых в зависимости от топики и этиопатогенеза инфекционного процесса. У больных с инфекциями бронхолегочного дерева и урогенитального тракта в мазках-соскобах и отделяемом слизистых цервикального канала, уретры и влагалища изучено содержание иммуноглобулинов (IgG, sIgА) и свободного секреторного компонента (sc), ИЛ-1β, 4, 6, 8, 9, 10, 12, γ-ИФН, α-ФНО и ГМ-КСФ, уровень экспрессии генов TLR-2, TLR-3, TLR-4, TLR-8, а также содержание лизоцима, общего белка и лейкоцитов.

У пациентов с урогенитальной хламидийной инфекцией независимо от формы процесса общим признаком формирования локальной противоинфекционной защиты в пределах слизистых является повышение уровня ИЛ-1b, 6, 8, a-ФНО, IgG, sIgA и sc-фрагмента, а также количества лейкоцитов. Наиболее высокие уровни перечисленных показателей были характерны для острого процесса, а минимально повышенные относительно здоровых индивидуумов – для лиц с хроническим не рецидивирующим процессом. Для острого процесса по сравнению с рецидивом хронического были характерны высокие уровни TLR-2, 4 и g-ИФН. В то же время пациенты с рецидивом хронического процесса демонстрировали дефицит уровней TLR-2, 4, которые были даже ниже значений контрольной группы. Рецидив процесса сопровождается повышением уровней ИЛ-4, g-ИФН, белка и микробной обсемененности биотопа на фоне резкого снижения уровней экспрессии эпителиоцитами TLR-2 в 3,0 и TLR-4 в 2,6 раза. При остром воспалительном поражении уретры, как и в цервикальном канале, резко повышались уровни экспрессии эпителиоцитами TLR-2, 4 в 3,1 и 2,1 раза и лейкоцитоз в 9,8 раза. При рецидиве хронического процесса в уретре уровни TLR-2, 4 также заметно снижались в 3,4 и 3,8 раза, соответственно, при сохранении 2-кратно повышенного лейкоцитоза по сравнению клинически здоровыми женщинами.

У пациентов с острым и хроническим бронхитом отмечен повышенный уровнень ИЛ-1b, 8, ГМ-КСФ, sIgA и снижение активности лизоцима. Наиболее высокие значения данные показатели имели при остром процессе. Уровни sc и общего белка не были изменены. При остром процессе в сравнении с рецидивом хронического явилось почти 6-кратное превышение уровней TLR-8, почти 4-кратное - TLR-2, 3-кратное - TLR-3, 4, g-ИФН и a-ФНО. Иммунореактивность слизистых при острых бронхитах характеризовалась более высоким уровнем синтеза TLR-2,4 при инфекциях, вызванных условно патогенной микрофлорой

(УПМ), чем вирусными агентами. Кроме того, острые вирусные инфекции сопровождались снижением экспрессии TLR-4 в 1,75 раза. Наиболее высокая реакция проявилась при микст-инфекции: уровни экспрессии TLR-2 значимо превышали таковые для вирусной этиологии в 3,1, а УПМ – в 2,4 раза. Для TLR-4 это соотношение составило соответственно 11,1 и 2,7 раза. Рецидив хронического процесса имел свои особенности. Так, экспрессия TLR-2 резко реагировала на вирусную природу инфекта, а TLR-4 – УПМ. При этом микст-инфекции протекали на фоне депрессии, как в случае поражения цервикального канала, системы TLR, что достаточно ярко проявилось в уровнях экспрессии TLR-4 – снижение по сравнению с нормой достигало 3,8 раза (p<0,05).

Сопоставление реакций слизистой двух биотопов (цервикального канала и бронхов), относящихся к различным системам органов, обнаружило совпадение основных векторов их иммунореактивности в процессе развития острого патологического процесса по всем исследованным показателям. Однако в слизистой цервикального канала выявлялись существенно более высокие уровни ИЛ-1, 8, g-ИФН, a-ФНО, а также sc. В то же время, в секрете бронхов отмечался более высокий уровень ГМ-КСФ и повышенная экспрессия TLR-2,4 эпителиоцитами. В случае рецидива хронического процесса общим было существенное повышение только уровней ИЛ-1, 8, ГМ-КСФ, sIgA и sc. В цервикальном канале в отличие от бронхов, были резко повышены (в5-6 раз) уровни g-ИФН, a-ФНО и IgG, а TLR-2,4 – наоборот, снижены соответственно в 3,9 и 2,4 раза.

Таким образом, характер иммунореактивности клеток слизистых на антигены микроорганизмов не зависит от локализации, а различается только их уровнем. Наиболее высокие уровни реагирования были свойственны слизистым урогенитального тракта: цервикальному каналу и уретре при микст-инфекциях. Результаты проведенного анализа демонстрируют информационно-диагностические свойства большинства клинико-иммунологических показателей, среди которых наиболее важна система TLR. Детекция экспрессированных на мембране иммунокомпетентных клеток и эпителиоцитов TLR имеет прогностическое значение. Уровень этой экспрессии может быть использован для индивидуализации лечения и профилактики хронизации патологического процесса. Показано также, что рецепторы врождённого иммунитета контролируют запуск цитокинового каскада, воспалительную реакцию, выраженность синтеза иммуноглобулинов. В содружестве с микрофлорой биотопа слизистых эти факторы определяют выраженность реакции мукозального иммунитета. Механизмы функционирования колонизационной резистентности и мукозального иммунитета являются едиными для всех биотопов слизистых независимо от их локализации. Изменения уровней микробиологических показателей, гуморальных факторов микробиоценозов и активности TLR слизистых открытых полостей отражают патогенетические механизмы инфекционных заболеваний и могут быть использованы в качестве диагностических и прогностических критериев течения инфекционно-воспалительных процессов различной локализации.

4. Исследования в области функционирования цитокиновой сети.

Проводились исследования изменения количества и соотношения рецепторов разных типов к иммуномодуляторным цитокинам как – одного из молекулярных механизмов регуляции реагирования клетки на действие медиатора. Была проведена оптимизация методов проточной цитометрии, для получения стабильных и воспроизводимых результатов по количественному анализу экспрессии рецепторов ИЛ-1бета. Выполнены работы по влиянию аллельного полиморфизма гена ИЛ-1бета и рецепторов для ИЛ-1бета на уровень их продукции и экспрессии мононуклеарными клетками и встречаемости аллельных вариантов генов цитокинов при атопическом дерматите. Проведены исследования по оценке экспрессии мембраносвязанных форм рецепторов ИЛ-1 на субпопуляциях иммунокомпетентных клетках у условно-здоровых доноров и больных атопическим дерматитом на интактных клетках и в культуре.

По тематике проводимых исследований регулярно публикуются статьи в научных журналах и книгах, материалы исследований представляются на международных и Российских форумах и конгрессах. Только за последние два года изданы две монографии и одно учебное пособие для системы послевузовского профессионального образования врачей, получены четыре патента на изобретения, представлено 12 докладов. Также в течение последних двух лет в рамках конгрессов «Человек и лекарство» и научно-практических школ по аллергологии и клинической иммунологии академиком Карауловым А.В. прочитано 8 лекций по мукозальному иммунитету и иммунокоррекции.

За последние годы сотрудниками кафедры опубликован ряд крупных работ, в том числе следующие монографии, руководства и учебные пособия:

Караулов А. В., Сергеев А. Ю., и др. (под ред. Сергеева Ю. В.)
Атопический дерматит: практическое руководство. М.: «Медицина для всех»: 2002. 184 с.
Успехи клинической иммунологии и аллергологии: том III. Караулов А. В. (редактор)М.: РАЕН: 2002. 418 с.)
Актуальные вопросы клинической медицины: том II. Караулов А. В. (редактор). М.: РАЕН: 2002. 272 с.
Караулов А. В. и др. Пневмония. М.: 2002. ЭИ: 480 с.
Клиническая иммунология и аллергология. Караулов А. В. (редактор). М: МИА: 2002. 651 с.
Сидоренко И. И., Балаболкин И. И. и соавт. Атопический дерматит: рекомендации для практических врачей М: Фармарус: 2002. 192 с.
Караулов А.В. и др.1000 формул клинической иммунологии М.: НАМ: 2003. 400 с.
Данная работа удостоена Золотой Медали ММА имени И. М. Сеченова «за лучшую научную работу»
Караулов А.В., Евсегнеева И.В., и др. Немедикаментозная иммунокоррекция М.: «Медицина для всех»: 2002. 264 с.
Сергеев А.Ю. и др. Новое в систематике грибов М.: НАМ: 2003. 500 с.
Сергеев А.Ю. и др. Грибковые инфекции: руководство для врачей М.: «Бином-Пресс»: 2003. 440 с.
Сергеев А.Ю. и др. Фармакотерапия микозов М.: «Медицина для всех»: 2003. 200 с.
Караулов А.В. и др. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. М.:МИА: 2002. 233 с.
Сергеев А.Ю. и др. Медицинская микробиология. Витебск: 2003. 328 с.
Зверев В.В, Бойченко М.Н., Быков А.С., Несвижский Ю.В., Караулов А.В., Пашков Е.П., Свитич О.А., Богданова Е.А., Буданова Е.В., Давыдова Н.В., Нечаев Д.Н., Рыбакова А.М., Усатова Г.Н., Хорошко Н.В., Быков С.А., Петрова Л.И. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология под ред.В.В.Зверева, А.С.Быкова, МИА, Москва, 2016